目的 构建能自动分泌性表达单核细胞趋化因子-1(MCP-1)的重组卡介苗.方法 分别以卡介苗(BCG)和人MCP-1cDNA为模板,通过PCR扩增得到120 bp的BCG Ag85B信号肽基因序列和300 bp的MCP-1基因序列.将上述两片段基因序列插入大肠杆菌-卡介苗穿梭质粒pMV261,得到重组质粒pMV261-Ag85B-MCP-1.测序鉴定完毕后,用电穿孔法将该重组质粒导入BCG中,构建重组卡介苗rBCG MCP-1.分别应用PCR扩增和Western blot检测rBCG MCP-1中MCP-1的基因和蛋白的表达.结果 质粒pMV261-Ag85B MCP-1用双酶切和PCR扩增及测序鉴定证实克隆基因BCGAg85B信号肽和MCP-1正确插入载体pMV261.Western blot显示rBCG MCP-1的培养上清和菌体中均可检测到MCP-1蛋白的表达.ELISA法可检测到培养上清中有高表达的MCP-1蛋白(340 pg/mL).结论 成功构建了能分泌MCP-1的新型重组卡介苗rBCG MCP-1,为进一步研究其抗膀胱肿瘤的疗效打下了基础.
作者：李杜渐；徐耀庭；韦芳；李惠明；黄汝强；许晓文；顾炜；顾伟平
来源：现代泌尿外科杂志 2013 年 18卷 2期
