目的建立表达外源性APO-1基因的大肠癌细胞株,观察APO-1表达细胞株在APO-1抗体作用下对体外培养的大肠癌细胞的抑制效应.方法采用分子克隆技术将APO-1基因插入真核表达载体pBK-CMV的多克隆位点之间.以脂质体介导法将目的基因导入受体细胞HT-29,用G418筛选克隆细胞.以Northern blot检测转导细胞APO-1 mRNA的表达.MTT法和直接记数法以及软琼脂集落形成实验检测转导株在APO-1抗体作用下的细胞增殖水平、生长曲线及细胞克隆形成率.结果成功地构建了真核表达载体pBK-CMV/APO-1 cDNA.转导细胞并经筛选后,获得了2株稳定的抗性细胞,从而建立了APO-1基因表达株HT-29 APO-1 cells).杂交结果表明,转导株APO-1mRNA水平的表达明显高于非转导株.转导细胞增殖速度、倍增时间、对数生长期等均比非转导株更为缓慢和处于抑制状态,集落形成能力低下,但差异无显著性意义,而在APO-1抗体作用下效果更为显著,差异有非常显著性意义.结论APO-1基因在大肠癌细胞中处于低表达状态;通过真核表达载体的介导,APO-1基因导入大肠癌细胞后,能有效地表达APO-1 mRNA.APO-1表达细胞株在APO-1抗体的作用下可明显抑制体外培养的大肠癌细胞的生长增殖,其作用机制与APO-1诱导细胞凋亡有关.
作者：肖冰；李恕军；姜泊；赖卓胜；王亚东；张亚历；张振书
来源：现代消化及介入诊疗 2001 年 6卷 3期
