目的 构建不携带病毒基因且可回复的肝细胞永生化载体,优化目前的肝细胞永生化方法.方法 构建含人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的无病毒可回复性肝细胞永生化载体,PCR扩增attB1-Kozak -hTERT(前端)-attB2和attB1 -hTERT(后端)/E2A/eGFP/F2A/neo-attB2,对相应大小条带切胶回收后,通过Gateway重组克隆技术BR反应和LR反应,以及酶切连接,构建最终目的载体PB -hTERT/E2A/eGFP/F2A/neo.结果 PCR及酶切和测序鉴定均证实成功构建了肝细胞永生化载体PB-hTERT/E2A/eGFP/F2A/neo,目的基因序列与GenBank报道一致.结论 成功构建不携带病毒基因且可实现回复的肝细胞永生化载体,有望提高永生化肝细胞临床应用的安全性.
作者：李爱民；王亚东；王泽楠；张洁；罗晓蓓；燕群；白杨；林建华；刘思德
来源：现代消化及介入诊疗 2012 年 17卷 2期
