目的 探讨shRNA干扰富含亮氨酸重复序列G-蛋白偶联受体5(Lgr5)的表达对结直肠癌肿瘤干细胞(CSCs)恶性行为的影响及其作用机制.方法 采用实验研究方法.流式细胞术分选Lgr5+结直肠癌CSCs,转染shLgr5慢病毒载体设为实验组;转染相应对照病毒,设为对照组.流式细胞术检测Lgr5+细胞比例,荧光定量PCR(qRT-PCR)检测Lgr5 mRNA的相对表达量;成球实验检测细胞自我更新能力变化;平板克隆形成实验及裸鼠皮下成瘤实验分别检测体内外成瘤能力变化;qRT-PCR检测细胞中干细胞基因(Oct4、Sox2、Nanog、KLF4)、CSCs基因(CD133、CD44、ALDH)及Wnt/β-catenin信号通路关键基因(Axin2、Wnt5a、Wnt3a、Fzd3、c-myc、VEGF、Ascl2、claudin-1) mRNA表达变化.正态分布的计量资料以-x±s表示,组间比较采用t检验.结果 (1) shRNA慢病毒介导转染效率,流式细胞术检测结果显示:实验组Lgr5+细胞为6.8％±1.0％,对照组为92.7％±3.3％,两组比较,差异有统计学意义(t=43.148,P＜0.05).qRT-PCR检测两组CSCs中Lgr5 mRNA相对表达量:实验组和对照组分别为0.168±0.057和1.148±0.004,两组比较,差异有统计学意义(t=28.778,P＜0.05).(2) Lgr5下调对结直肠癌CSCs成球和成瘤能力的影响,成球实验结果显示:实验组和对照组成球数量分别为(29±6)个和(410±1

作者：石刚；肖云峰；王斯斯；刘佳嘉；石国露；侯松林；李敬东；冷政伟

来源：中华消化外科杂志 2017 年 16卷 12期