目的 观察siRNA表达载体对293T细胞神经生长因子neuritin的抑制作用,为进一步研究neuritin基因的功能及作用机制奠定基础.方法 通过RT-PCR技术筛选neuritin高表达细胞株;利用分子克隆技术,采用两步法构建 PBS/U6-neuritin siRNA(1～3)表达载体,脂质体法转染293T细胞,稳定转染后采用Western-blot技术进行干扰效率的筛选鉴定.结果 293T细胞与L-02细胞的RT-PCR产物为500 bp左右可见特异性条带,选择293T细胞作为实验细胞株,测序结果显示经2次构建后PBS/U6-neuritin siRNA表达载体在338 bp处出现发夹结构,说明构建成功.转染72 h后Western-blot技术检测PBS/U6-neuritin siRNA-(1～3)在不同程度上均可使293T细胞内源性Neuritin蛋白表达下调.结论 PBS/U6-neuritin siRNA(1～3)表达可以有效抑制293T细胞系Neuritin蛋白的表达.
作者：张峤；罗星；黄瑾
来源：新疆医科大学学报 2012 年 35卷 6期
