目的 探讨3种外周血单个核细胞(PBMC)分离方法对后续流式细胞术分析结果的影响,并比较PBMC冻存前后流式细胞术分析结果.方法 2019年5月,选择四川大学华西医院人类疾病和免疫治疗研究室6位体检健康的工作人员为受试对象,采集每位受试者外周血15 mL,平均分为3份,分别采用Ficoll离心法、羟乙基淀粉(HES)沉降法和HES+Ficoll法分离PBMC.显微镜下观察3种方法分离所得PBMC的形态,并采用细胞计数仪进行细胞计数.分离所得PBMC于冻存前和冻存6个月后行流式细胞术分析,计算PBMC中淋巴细胞所占比例、淋巴细胞中活细胞(FVS780荧光强度小于102为活细胞)所占比例(细胞存活率)和活细胞中CD4+T细胞数与CD8+T细胞数的比值(CD4+T/CD8+T).结果 3种分离方法得到的PBMC形态均一致.与其他2种分离方法相比,HES沉降法分离得到的PBMC除淋巴细胞外还有部分红细胞.HES沉降法所得PBMC数量显著多于Ficoll离心法与HES+Ficoll法(P<0.05);Ficoll离心法所得PBMC数量高于Ficoll+HES法(P<0.05).冻存前和冻存6个月后,Ficoll离心法、HES沉降法和Ficoll+HES法得到的PBMC的存活率比较差异均无统计学意义(P>0.05);HES沉降法得到的PBMC中淋巴细胞比例显著低于Ficoll离心法和HES+Ficoll法(P<0.05);Ficoll离心法与HES+Ficoll法所得到的PBMC中淋巴细胞
作者：牟大超；吴沙沙；周轶
来源：新乡医学院学报 2022 年 39卷 5期
