目的 通过对核糖体18S rRNA基因内部转录间隔区(internal transcribed spacer,ITS)序列的PCR鉴定,建立快速、准确地鉴定真菌性角膜炎致病真菌种属的方法.方法 采用眼科常见5种致病菌标准菌株;镜检确诊真菌阳性的角膜炎临床标本29例.其中真菌培养阳性15例,真菌培养阴性14例.所有标本均采用液氮研磨结合小玻璃珠振荡法破碎真菌细胞壁,提取真菌基因组DNA,并以此为模板PCR扩增其18S rRNA基因ITS保守区序列,进行基因测序后在基因库中查询致病菌的种属,与镜检结果比对.结果 禾谷镰刀菌、尖孢镰刀菌、燕麦镰刀菌、烟曲霉、白色念珠菌等5种标准菌株培养物和29例临床真菌样本(包括15例真菌阳性培养物和14例真菌培养阴性的角膜病变组织样本),各5 mg样品中提取的DNA样品的浓度在1.7～22.5 mg·L-1.PCR扩增后5种标准菌株均有目的条带,15例真菌阳性培养物也均有目的条带,14例真菌培养阴性的角膜病变组织样本有2例有目的条带,其余12例没有目的条带.标准菌株的PCR鉴定阳性率100
作者：安娜；王亚妮；刘先宁；朱娟莉；朱秀萍；吴洁
来源：眼科新进展 2010 年 30卷 11期
