背景 视网膜微血管周细胞(RMPs)在糖尿病视网膜病变(DR)等视网膜新生血管性疾病中的作用日益受到重视,并被视为潜在的治疗靶点.然而因组织材料来源受限及细胞分离纯化不易,RMPs体外研究工作的开展受到了限制. 目的 建立简便的大鼠RMPs分离、培养和纯化方法.方法 摘取清洁级健康雄性SD大鼠的眼球,置于体积分数75％乙醇中浸泡1 min,用眼科显微手术器械分离获取视网膜并将其剪成碎片,依次用2.5 g/L胰蛋白酶和2 g/L Ⅰ型胶原酶各消化15 min,消化后分别过直径100 μm和55 μm滤网,收集视网膜消化后的微血管片段,用含有体积分数20％胎牛血清的低糖型DMEM接种于6孔板,至培养14 ～ 16 d细胞达到80％～90％融合时进行消化传代,培养和传代期间通过换液法及差异消化法去除杂质细胞.用倒置相差显微镜观察细胞的形态和生长状态,用免疫荧光法检测细胞中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、血小板源性生长因子受体-β(PDGFR-β)、von Willebrand因子(vWF)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达,以鉴定RMPs. 结果 RMPs在接种后24 ～ 48 h自微血管片段中迁移出,7d后形成中等大的细胞集落,14～ 16 d后达到80％ ～ 90％融合状态.RMPs传代后生长速度加快,至12～14 d达到融合.形态学鉴定显示,培养的细胞呈宽大、扁平、不规则形并伴多个突起
作者：刘光辉；孟春；徐朝阳；刘安；黄以鹏；黄陈稳
来源：中华实验眼科杂志 2014 年 32卷 1期
