背景 脉络膜新生血管(CNV)是多种眼底疾病致盲的病理基础,视网膜色素上皮(RPE)细胞氧化应激损伤在CNV生成中具有重要作用.RPE氧化应激损伤能激活肿瘤坏死因子超家族的p75NTR受体,引起血管内皮细胞增生,但其调控机制尚未明确.目的 探讨RPE细胞中p75 NTR受体在CNV形成过程中的作用,并对其作用机制进行分析.方法 体外培养人RPE细胞(ARPE19细胞系),用p75 NTR受体过表达质粒转染RPE细胞,分别采用逆转录PCR(RT-PCR)和Western blot法进行转染细胞中p75NTR受体基因和蛋白水平检测,以未转染p75 NTR受体过表达质粒的RPE细胞作为对照组.采用BrdU法检测各组细胞的增生活性;采用Annexin V-FITC/PI双染法及流式细胞仪检测各组细胞的凋亡率;用H2DCFDA荧光法和流式细胞计数检测细胞内活性氧簇(ROS)阳性百分数;采用激光扫描共焦显微镜观察各组细胞线粒体标志物的表达(膜电位)及细胞色素C的表达;采用Western blot法检测和比较各组细胞中裂解caspase-3、Fas及血管内皮生长因子165(VEGF165)蛋白的相对表达水平.结果 p75NTR受体质粒转染组细胞中p75 NTR受体的mRNA及蛋白表达量分另是对照组的(6.11±0.77)倍和(7.42±0.48)倍,差异均有统计学意义(t=11.49、23.17,均P<0.01).BrdU法检测结果显示,p75NTR受体质粒转染12、24、36和4
作者:齐赟;白玉婧;黎晓新;石璇
来源:中华实验眼科杂志 2016 年 34卷 1期