目的:探讨小干扰RNA-Yes相关蛋白1(siRNA-YAP1)对转化生长因子β
2(TGF-β
2)诱导的人晶状体上皮细胞(LECs)发生上皮-间质转化(EMT)的抑制作用。
方法:将人LECs株HLEB-3细胞分为对照组和TGF-β
2诱导组,正常对照组采用无血清低糖培养基处理细胞,TGF-β
2诱导组采用10 ng/ml TGF-β
2处理细胞,分别培养24 h。另将HLEB-3细胞分为siRNA空载体组、siRNA-YAP1转染组、siRNA空载体+TGF-β
2组和siRNA-YAP1+TGF-β
2组,分别采用含有siRNA空载体和siRNA-YAP1序列的质粒转染细胞。采用实时荧光定量PCR、细胞免疫荧光染色和Western blot法检测各组细胞中转录共激活因子Yes相关蛋白1(YAP1)mRNA及其蛋白的相对表达量;采用细胞免疫荧光、Western blot法检测各组中LECs EMT相关标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)在细胞中的表达变化。
结果:TGF-β
2诱导组中E-cadherin蛋白相对表达量为0.830±0.104,低于正常对照组的1.180±0.118,TGF-β
2诱导组中Vimentin蛋白相对表达量为1.240±0.110,高于正常对照组的0.797±0.110,差异均有统计学意义(
t=3.857,
P=0.018;
t=-4.933,
P=0.008);TGF-β
作者:郑柳;胡超;杨彬彬;杨兴刚;丁芝祥
来源:中华实验眼科杂志 2021 年 39卷 4期