目的:阐明体外扩增得到的口腔链球菌丙酮酸氧化酶基因的上游区序列是否即是调控序列,是否具有启动子活性.方法:将口腔链球菌丙酮酸氧化酶基因调节区PCR扩增产物经Hind Ⅲ酶切,克隆至载体PKK232-8,转化E.coli JM109,通过氯霉素抗性筛选阳性菌落,重新增菌后取质粒DNA,再经酶切鉴定.将重组子点种于不同浓度的氯霉素平板上,37℃培养18 h,观察菌落生长情况,测定重组质粒转化子对氯霉素的抗性水平.结果:筛选得到1个阳性菌落,重组质粒DNA的酶切产物经10 g/L琼脂糖凝胶电泳,表明获得片段的Mr约为1.3 kb,与预计大小相符,证实其为阳性重组克隆.测定重组质粒转化子对氯霉素的抗性水平显示其抗性达1 020 μg/mL.结论:本研究已成功克隆口腔链球菌丙酮酸氧化酶调节基因.
作者：章锦才；俞少杰；张蓉；张蕴惠
来源：牙体牙髓牙周病学杂志 2003 年 13卷 6期
