目的 通过实验验证ANLN为microRNA-217(miR-217)的靶基因.方法 使用生物学软件预测miR-217调控的靶基因可能为ANLN.设计并合成mR-217结合的ANLN及突变型ANLN(mutANLN)序列,将其PCR扩增的片段插入表达质粒psiCHECK-2,构建重组质粒psiCHECK-2-ANLN及psiCHECK-2-mutANLN.采用脂质体法将2个重组质粒单独或分别与miR-217、miR-217 inhibitor及与人同源性远的miRNA序列(NC)、NC inhibitor共转染胰腺癌PANC1细胞,采用双荧光素酶报告系统检测荧光素酶活性,采用蛋白质印迹法检测ANLN蛋白的表达.结果 转染psiCHECK-2-ANLN、psiCHECK-2-ANLN+miR-217、psiCHECK-2-ANLN+miR-217 inhibitor、psiCHECK-2-ANLN+NC、psiCHECK-2-ANLN+ NC inhibitor各组间的荧光素酶活性分别为2.221±0.188、0.769±0.061、3.764±0.371、2.265±0.201、2.242 ±0.018,差异有统计学意义(F =77.405,P＜0.01),但psiCHECK-2-ANLN组、psiCHECK-2-ANLN+ NC组及psiCHECK-2-ANLN+ NC inhibitor组两两比较差异无统计学意义,而psiCHECK-2-ANLN+ miR-217组的荧光素酶活性较这3组明显下降,psiCHECK-2-ANLN+miR-217inhibitor组活性较其他4组明显升高(P值均＜0.01).转染psiCHECK-2-mutANLN各组间荧光素酶活性差异无统计学意义(P=0.053).psiCHECK-2-ANLN+

作者：江寅；侯宝华；简志祥；王慧玲；崔鹏；区金锐

来源：中华胰腺病杂志 2013 年 13卷 3期