目的:克隆单纯疱疹病毒2型(HSV-2)潜伏相关转录子蛋白读码框2(LAT ORF2)基因,构建真核表达载体并在真核细胞中表达,用于进一步研究LAT介导的HSV-2潜伏及激活感染机制. 方法：以构建成功的pVAX—LAT重组质粒为模板,根据GenBank中HSV-2 LAT ORF2基因的核苷酸序列设计引物,并在引物的5'端分别引入Kpn I和Pst I酶切位点.用PCR特异性扩增LAT基因ORF2片段,PCR产物纯化回收后经Kpn I、Pst I双酶切,再次回收后产物与同样经双酶切的pcDNA 6／myc—His B质粒进行连接,Amp抗性筛选阳性重组子．双酶切及测序鉴定连接产物.在脂质体介导下瞬时转染Vero细胞,用RT-PCR及SDS-PAGE检测其在Vero细胞中的表达. 结果：重组质粒经Kpn I和Pst I双酶切获得预期大小的两条片段,测序表明ORF2正确,RT-PCR及SDS-PAGE显示转染了重组质粒的Vero细胞内有目的基因及其编码蛋白的表达. 结论：成功构建了ORF2-pcDNA 6／myc-His B重组质粒,并可在Veto细胞内有效表达.
作者：杨慧兰；赵举峰；樊建勇；周翠；黄小晏；齐维
来源：医学研究生学报 2008 年 21卷 9期
