目的:探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对Aβ25~35诱导的神经元细胞氧化损伤的影响及作用机制。方法分离新生SD大鼠皮层神经元细胞,并分为空白对照组、Aβ25~35组、1μg/L BDNF+Aβ25~35组、10μg/L BDNF+Aβ25~35组、100μg/L BDNF+Aβ25~35组、BDNF+siRNA-scramble+Aβ25~35组、BDNF+siRNA-TrkB+Aβ25~35组、BDNF+siRNA-SIRT1+Aβ25~35组。不同浓度BDNF诱导培养细胞48 h,siRNA-scramble、siRNA-TrkB或siRNA-SIRT1采用Lipo-fectamine 2000转染细胞,诱导培养24 h。 MTT法和流式细胞术检测神经元细胞的细胞存活率和凋亡率,利用硫代巴比妥酸法和黄嘌呤氧化酶法检测各组细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,qRT-PCR和Western blot检测TrkB、SIRT1、PGC-1α、Bcl-2、Bax的表达。结果与空白对照组比较,Aβ25~35组细胞存活率明显降低,细胞凋亡率增加,MDA含量升高,SOD活性降低(P<0.05)。与Aβ25~35组比较,不同浓度BDNF均能提高细胞存活率,降低凋亡率,升高细胞内SOD活性,降低MDA含量,上调TrkB、SIRT1、PGC-1α、Bcl-2表达,减少Bax表达(P<0.05),并且呈现剂量依赖性。沉默SIRT1表达后抑制BDNF对Aβ25~35诱导细胞凋亡的保护作用;沉默TrkB表达后抑制BDNF对SIRT1/PGC-1α信号通
作者:姚婕;张红梅;阎丽萍;姬文涛;马巧亚
来源:中国医药导报 2016 年 13卷 20期