目的:为了探讨腺病毒载体用于基因治疗的可行性及突变p27的抗肿瘤特性,构建复制缺陷型重组hp27mt基因腺病毒.方法:hp27mt自载体pORF9-hp27mt中切出,经2次亚克隆,插入到穿梭质粒pShuttle-CMV中,形成转移质粒pShuttle-CMV-hp27mt;然后再用PmeI线性化的pShuttle-CMV-hp27mt转化含腺病毒骨架质粒pAdeasy-1的超感受态BJ5183,使其在细菌内发生同源重组.重组质粒鉴定正确后经Pac Ⅰ酶切,转入Ad293细胞,包装成重组腺病毒Ad-hp27mt.采用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用紫外分光光度计进行滴度测定.用重组p27mt的腺病毒Ad-p27mt感染大肠癌细胞SW480,Western Blot检测p27蛋白的表达.结果:用含pShuttle-CMV-hp27mt转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183后,可获得约30
作者：陈珺；徐少勇；邓长生；王家宁；黄永章
来源：郧阳医学院学报 2003 年 22卷 6期
