目的:构建含有甲型流感病毒M2基因的真核表达载体.体外转染真核细胞株HEK293细胞并检测目的蛋白的表达.方法:从接种人流感病毒株A/PR/8/34(H1N1)的鸡胚尿囊液中提取病毒RNA,用特异引物进行RT-PCR,扩增M2基因.通过分子克隆技术将所扩增片段插入真核表达质粒载体pcDNA3.1(+).经酶切及PCR鉴定后用PolyFect脂质体将其转染到HEK293细胞中,通过免疫荧光技术鉴定其表达.结果:经双酶切、PCR及测序鉴定证实M2基因的真核表达载体构建成功.免疫荧光技术证实流感病毒M2基因的表达.结论:甲型流感病毒M2蛋白是一种具有高保守性,可形成离子通道并影响流感病毒表面蛋白血凝素(HA)天然构象的形成,被认为是具有交叉免疫保护性的结构蛋白.甲型流感病毒M2基因真核表达质粒的构建及成功表达将为甲型流感病毒基因工程疫苗,通用疫苗和核酸疫苗的研究打下基础.
作者：杨靖；张卫东；曹康；蒋中华；李虹；李明远
来源：郧阳医学院学报 2006 年 25卷 1期
