目的 为研究党参多糖代谢途径,从党参Codonopsis pilosula根中克隆多糖代谢关键酶尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶CpUGPase基因,并进行序列分析和原核表达.方法 根据党参转录组中CpUGPase基因序列设计引物,通过RT-PCR扩增得CpUGPase开放阅读框(ORF)序列,并进行TA克隆、测序和序列分析;构建原核表达载体PET-28a-CpUGPase,转入大肠杆菌BL21 (DE3)后,在异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导下进行表达.结果 CpUGPase ORF序列全长1 413bp,编码470个氨基酸.序列分析表明,CpUGPase基因具有保守的UGPase euk催化位点,属于A型糖基转移酶蛋白家族.构建PET-28a-CpUGPase重组质粒,获得稳定的原核表达体系.SDS-PAGE结果显示该蛋白的大小约54 900,与预测的蛋白相对分子质量一致.结论 从党参根中克隆得到CpUGPase基因,并建立了稳定的原核表达体系,为进一步纯化CpUGPase蛋白,研究其结构和功能奠定了基础.
作者：李晶；郭琼琼；孙海峰；高建平
来源：中草药 2016 年 47卷 21期
