目的 克隆掌叶大黄Rheumpalmatum转录因子基因RpNAC1,进行生物信息学、亚细胞定位及表达模式分析.方法根据转录组中一个NAC unigene,利用RT-PCR克隆开放阅读框(open reading frame,ORF).通过生物信息软件预测基因编码蛋白的理化性质、结构域等分子特征.采用DNAStar6.0和MEGA7.0分别进行氨基酸序列比对和进化分析.构建绿色荧光蛋白(GFP)融合表达载体,以农杆菌侵染烟草叶片的瞬时表达法分析亚细胞定位.运用qRT-PCR检测基因表达模式.结果分离到RpNAC1 基因,ORF(1269bp),编码一个由422个氨基酸组成的蛋白质,相对分子质量47 070,等电点5.80,包含一个保守NAC结构域(32～181),与多种植物NAC蛋白一致性较高(62.42％～88.7％),聚在植物NAC分子进化树的NAC2分支,与甜菜NAC(XP 010694507)亲缘关系较近.RpNAC1-GFP融合蛋白定位在烟草细胞核内.RpNAC1基因在一年生植株根中表达量最高,根茎中表达量最低,相对表达量分别为叶中的5.37、0.012倍;该基因响应200μmol/L赤霉素(gibberellin,GA3)处理后在24 h内总体上调,200 μmol/L茉莉酸甲酯(methyl jasmonate,MeJA)处理1 h和12 h基因显著上调,200 μmol/L 水杨酸(salicylic acid,SA)处理12 h显著诱导基因表达,200μmol/L脱落酸(abscisic acid,ABA)处理抑制基因表达,200 μmo

作者：梁小燕；李元敏；李依民；李慧；杜鹃；张明英；高静；彭亮；张岗

来源：中草药 2021 年 52卷 23期