背景与目的：二氢叶酸还原酶(dihydrofolate reductase，DHFR)在卵巢上皮癌铂类耐药细胞中高表达。该研究旨在探讨DHFR基因沉默对卵巢癌细胞体外生物学行为的影响，为卵巢癌铂类耐药的治疗奠定基础。方法：设计DHFR基因靶向的发夹状siRNA，筛选出最佳siRNA沉默片段，构建携带有目的基因的慢病毒载体细胞即转染组(DHFR-pGCSIL-SKOV3细胞)及阴性对照组细胞(pGCSIL-SKOV3细胞)。采用流式细胞仪检测3组细胞在不同的顺铂质量浓度(2.5、5.0、10.0和20.0μg/mL)下不同时间段(24、48及72 h)的凋亡情况以及IC50顺铂质量浓度(4.4μg/mL)的周期变化；采用高效液相色谱法检测不同顺铂质量浓度(2.5、5.0和7.5μg/mL)不同时间段(24和48 h)药物作用后3组细胞内的顺铂浓度。采用透射电镜观察IC50顺铂质量浓度(4.4μg/mL)3种细胞的超微结构变化。结果：将退火后的双链寡核苷酸片段连接到pGCSIL/GFP载体，测序结果正确。转染SKOV3细胞后，蛋白[质]印迹法(Western blot)鉴定干扰效果。在给药24、48和72 h后，DHFR-pGCSIL-SKOV3、pGCSIL-SKOV3及SKOV3三组细胞的凋亡率随着顺铂质量浓度(2.5、5.0、10.0和20.0μg/mL)的上升而升高， DHFR-pGCSIL-SKOV3细胞给药48和72 h后的凋亡率明显高于pGCSIL-SKOV3及SKOV3细胞，差异有统计学

作者：李状；张玮；王琪；阳志军；李力

来源：中国癌症杂志 2016 年 26卷 4期