目的:建立稳定高表达热休克蛋白90(HSP90)细胞株,研究HSP90高表达对细胞应激反应的影响.方法:含人HSP90β全长基因的重组质粒pSmycHSP经克隆、纯化、酶切鉴定后,用电穿孔法转染到小鼠成纤维细胞系NIH-3T3细胞内.经G418筛选、克隆分离培养,用免疫荧光、免疫印迹鉴定阳性克隆.用高温作用(44℃,20min、40min)模拟氧化应激环境,以转染空质粒的NIH-3T3细胞为对照,全自动生化分析仪观测培养液中乳酸脱氢酶(LDH)漏出活性变化、流式细胞仪测定DNA受损细胞数,分析细胞应激状态对细胞膜和DNA的损害及HSP90高表达对细胞应激反应的影响.结果:转染pSmycHSP的NIH-3T3细胞HSP90免疫荧光染色增强;与对照相比,44℃,20min时培养液中漏出的LDH无显著差别,DNA损害加重;44℃,40min时LDH漏出减少,DNA的损害减弱.结论:已建立稳定高表达HSP90 NIH-3T3细胞株;HSP90高表达在不同的应激强度下对细胞的影响呈现复杂性,其应激保护作用与应激强度密切相关.
作者：陈雪梅；邹飞
来源：中国病理生理杂志 2004 年 20卷 4期
