目的:获取含凋亡基因fas表达调控元件cdc25A片段和fas开放阅读框架的cdc25A-fas嵌合基因,构建和鉴定真核表达载体pAdTrack-CMV-cdc25A-fas和pAdTrack-cdc25A-fas,为将口腔鳞癌细胞固有的促细胞增殖信号转变为促细胞凋亡信号的研究奠定基础.方法:根据fas基因、cdc25A已知序列设计合成引物,采用PCR技术从pBLF58-1质粒中扩增得到嵌合基因cdc25A-fas;然后定向克隆至真核表达载体pAdTrack-CMV和pAdTrack,分别转化大肠杆菌E.coli DH5α感受态细胞;卡那霉素筛选阳性克隆;进行PCR、酶切鉴定和序列分析.结果:PCR扩增得到特异的1 603bp的cdc25A-fas片段;筛选并鉴定得到含pAdTrack-CMV-cdc25A-fas和pAdTrack-cdc25A-fas的大肠杆菌E.coli DH5α阳性克隆.结论:成功构建了真核表达载体pAdTrack-CMV-cdc25A-fas和pAdTrack-cdc25A-fas,为下一步研究其在肿瘤基因治疗中的作用奠定基础.
作者：冯崇锦；李春阳；钟雪云；夏娟；程斌；郭俊兵
来源：中国病理生理杂志 2006 年 22卷 6期
