目的:研究在人类Jurkat白血病细胞株中依托泊苷诱导凋亡的分子机制,揭示由依托泊苷启动的凋亡信号通路.方法:分别用annexin V-FITC和碘化丙啶(PI)染色,通过流式细胞仪测定annexin V阳性和出现亚二倍体DNA的凋亡细胞.以3,3'-dihexyloxyacarboeyanine iodide[DiOC6(3)]为染色剂,采用流式细胞术检测细胞线粒体膜电位的变化.采用离心技术分离细胞的胞浆与线粒体.细胞色素c从线粒体转入胞浆,caspase-3的激活,多聚二磷酸腺苷核糖聚合酶(PARP)的切割等蛋白质的表达由免疫印迹技术(Western blotting)检测.结果:依托泊苷诱导Jurkat白血病细胞凋亡,细胞凋亡与依托泊苷的作用时间呈线性关系.广谱的caspase抑制剂zVAD.fmk可抑制依托泊苷诱导的DNA片段化和磷脂酰丝氨酸外翻.依托泊苷引起的线粒体膜电位下降早于DNA片段化和磷脂酰丝氨酸外翻,形成明显对照的是zVAD.fmk不能阻断依托泊苷诱导的线粒体膜电位的下降.依托泊苷介导细胞色素c从线粒体释放到胞浆,激活caspase-3,caspase-3的底物PARp被切割.结论:依托泊苷诱导Jurkat白血病细胞株凋亡的机制是降低线粒体膜电位和释放细胞色素c到细胞浆启动线粒体信号转导通路,最终激活caspase而导致细胞凋亡.
作者：刘家浩；唐洪丽；阮为勇
来源：中国病理生理杂志 2007 年 23卷 3期
