目的:构建bcl-2特异性siRNA真核细胞表达载体,并初步观察其对膀胱癌细胞生长的影响.方法:根据GenBank提供的bcl-2 cDNA序列,设计双链小干扰RNA(siRNA),再转化为能表达其小发卡结构RNA(shRNA)的DNA序列,并与含U6启动子的pGenesil-1质粒定向连接,构建真核表达载体pGenesil-1545、pGenesil-1 555.经限制性内切酶酶切和DNA测序进行鉴定.转染T24细胞,采用半定量RT-PCR观察重组质粒对bcl-2mRNA表达的影响;用MTT法观察重组质粒对T24细胞体外生长的抑制作用.结果:构建了bcl-2 siRNA的真核表达载体pGenesil-1545、pGenesil-1 555,并经限制性内切酶酶切和DNA测序证实与设计完全一致.转染T24细胞72 h后,RT-PCR显示bcl-2基因表达下调接近80
作者：许可慰；黄健；林天歆；郭正辉；胡明；尹心宝；潘秋辉
来源：中国病理生理杂志 2007 年 23卷 5期
