目的:研究胰腺癌相关基因寡核苷酸芯片的构建及其在检测胰腺癌基因表达谱方面的应用.方法:有目的地筛选胰腺癌相关基因,采用合成后点样的方法将合成的寡核苷酸探针点于同型双功能偶联剂(APS-PDC)包被的基片上,制成寡核苷酸基因芯片.Trizol法抽提组织总RNA,并用Qiagen Rneasy kit进一步纯化.在cDNA第1链合成过程中,通过反转录酶将CyDye标记核苷酸直接渗入到cDNA中制备荧光探针,其中用Cy3-dCTP标记胰腺癌组织,Cy5-dCTP标记正常胰腺组织.将荧光标记探针定量后与芯片杂交16-18 h.用Agilent扫描仪进行扫描,Imagene3.0软件(Biodiscovery,Inc.)图像分析,计算2种荧光Cy3与Cy5信号强度的比值.挑选差异基因CDC25B和TUSC3进行荧光定量PUR(Sybrgreen方法)验证,以B-actin基因为内参照基因,PCR产物的定量方法采用比较Ct法.结果:芯片杂交扫描图像信号清晰,具有较低的整体背景和较高的信噪比,各阳性质控点信号均匀一致,阴性质控点和空白点信号低.与正常组织相比,胰腺癌组织中差异表达基因24条,占全部基因的25.5
作者：石欣；卫文俊；高乃荣；程张军；汤水辉
来源：中国病理生理杂志 2007 年 23卷 10期
