目的:通过siRNA介导的RNA干扰技术沉默类风湿关节炎(RA)成纤维样滑膜细胞(FLS)mTORC2的特异组成蛋白RICTOR的表达,观察其对细胞活力的影响.方法:组织块法培养RA-FLS.应用阳离子脂质体转染的方法,把化学合成的特异性RICTOR siRNA转染RA-FLS,并以转染非特异性siRNA作为阴性对照.利用荧光定量PCR法分析转染24h后细胞RICTOR mRNA表达水平的变化；Western blotting法分析转染48和72 h后细胞RICTOR蛋白表达水平的变化；以噻唑蓝(MTr)比色法检测转染成纤维样滑膜细胞不同时间(24、48和72h) RICTOR siRNA对细胞活力的影响.结果:荧光定量PCR结果显示特异性RICTOR siRNA转染组与对照组相比,细胞中RICTOR的mRNA表达水平显著下调,24h干扰效率达78.3％±63.71％ (P ＜0.01).Western blotting结果显示与对照组相比,RICTOR siRNA转染组48 h和72 h后RICTOR蛋白表达水平明显降低,沉默效率分别为92.48％±6.14％和98.57％±1.40％(均P＜0.01).MTT结果显示,早期(24和48 h)RICTOR siRNA转染组与阴性对照组细胞存活率比较无显著差异；72 h后,RICTOR siRNA转染组与阴性对照相比,细胞活力明显降低,抑制率为90.14％±1.90％ (P＜0.01).结论:转染特异性RICTOR siRNA可降低RA-FLS的活力,提示mTORC2可能与RA-FLS的生长有关.

作者：郭欣；胡爱玲；方霖楷；刘岩；潘云峰

来源：中国病理生理杂志 2013 年 29卷 3期