目的:观察乙肝病毒X蛋白(HBx)对肾小管上皮细胞凋亡的作用,并探讨其在乙型病毒肝炎相关性肾炎(HBVGN)发病中的分子机制。方法:将构建好的HBx真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBx转染至体外培养的人肾近曲小管上皮细胞( HK-2细胞)中。 Western blotting 法检测转染后目的蛋白的表达及JAK2/STAT3信号通路的活化。细胞免疫荧光检测STAT3及p-STAT3表达水平。 CCK-8法检测细胞增殖活性。 Hoechst 33342染色观察细胞的形态学改变。透射电镜观察细胞的超微结构及凋亡。 Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果:转染目的基因HBx后,p-JAK2及p-STAT3表达水平均显著增加;同时,细胞增殖明显受抑。透射电镜、Ho-echst 33342染色及Annexin V/PI双染流式细胞术检测发现HBx促进HK-2细胞凋亡。 AG490( JAK2/STAT3信号通路阻断剂)孵育后能够部分阻断JAK2/STAT3信号通路,减少HBx 所致细胞凋亡。结论:HBx 通过激活JAK2/STAT3信号通路导致肾小管上皮细胞凋亡,可能参与了HBV直接损伤肾组织的致病机制。
作者:何平;李丹;李德天;冯国和
来源:中国病理生理杂志 2014 年 8期