目的：构建重组人肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（ tumor necrosis factor－related apoptosis－indu－cing ligand，TRAIL）原核表达质粒pET－28a （＋）－TRAIL114－281，优化蛋白表达和纯化条件，制备重组人可溶性TRAIL并鉴定其活性。方法：使用CCK－8初步验证TRAIL是否具有抑制肿瘤细胞生长的生物活性；将制备的TRAIL单独或联合50 nmol／L硼替佐米应用于H460细胞（对TRAIL敏感）和K562细胞（对TRAIL抵抗）24 h，流式细胞术检测细胞凋亡率，比色法检测caspase－8、－9、－3的活化程度，Western blot分析细胞中Bax、Bcl－2和cFLIP蛋白的表达。流式细胞术检测硼替佐米处理H460细胞和K562细胞24 h后DR4和DR5的表达量变化。结果：制备了具有生物学活性且性质稳定的重组人可溶性TRAIL，且成功诱导H460和K562细胞凋亡。不同浓度TRAIL处理H460细胞后其凋亡率随着TRAIL浓度升高而显著升高（P＜0．05），但K562细胞凋亡率并未随着TRAIL浓度明显升高。联合用药组的H460和K562细胞凋亡率均显著高于单独用药组（P＜0．05），凋亡过程中caspase－8、－9、－3均被活化，药物处理组的Bcl－2和cFLIP表达量均比对照组下降，尤其联合用药组表达量下降最为显著（ P＜0．05），而Bax表达量无明显变化。硼替佐米处理H460
作者：李雪燕；徐霞
来源：中国病理生理杂志 2015 年 11期
