目的：研究BARF1表达下调对EBV阳性胃癌细胞凋亡的影响，以及BARF1基因沉默介导细胞凋亡的分子机制。方法：siRNA和NCsiRNA分别转染NUGC3和SNU719细胞，运用Western blot测定细胞中BARF1、Bcl－2、Bax、细胞色素C、caspase 3和caspase 9的蛋白表达；RT－PCR测定BARF1、Bcl－2和Bax mRNA的表达；台盼蓝染色法测定细胞存活率；Annexin V－FITC／PI染色法和流式细胞仪测定细胞凋亡；细胞凋亡因子抗体芯片分析细胞中凋亡相关蛋白的表达；线粒体膜电位检测试剂盒测定线粒体膜电位；免疫共沉淀检测细胞中Apaf－1和caspase 9的相互作用。结果：与空白对照组和阴性对照组相比， BARF1基因沉默显著诱导NUGC3和SNU719细胞凋亡，而线粒体膜电位显著降低。 BARF1沉默基因能促进促凋亡蛋白的表达并抑制抗凋亡蛋白的表达，Bcl－2／Bax比例显著降低；而caspase抑制剂能抑制由 BARF1基因沉默介导的细胞凋亡。在 siRNA 转染的细胞中， caspase 3和caspase 9蛋白发生裂解，细胞色素C的浓度显著高于阴性对照组，Apaf－1蛋白与caspase 9蛋白在细胞质中能够发生相互作用。结论：BARF1基因沉默通过线粒体途径调节Bcl－2和Bax蛋白的表达进而诱导NUGC3和SNU719细胞凋亡，并呈caspase通路依赖关系。
作者：刘俊；张雪林；任永生；郑新
来源：中国病理生理杂志 2015 年 11期
