目的：探讨p21活化激酶4（PAK4）对非小细胞肺癌（NSCLC）侵袭和迁移能力的影响及相关机制。方法：PAK4－siRNA或阴性对照转染A549和NCI－H520细胞株，实时荧光定量PCR和Western blot 分别检测细胞PAK4 mRNA和蛋白表达水平，Transwell小室法检测其对细胞侵袭和迁移能力的影响；Western blot检测其LIMK1、cofilin及其磷酸化水平；免疫共沉淀检测PAK4和LIMK1蛋白是否直接绑定；体外激酶分析实验检测LIMK1是否是PAK4的激酶底物；Western blot检测10例非小细胞肺癌组织中PAK4和磷酸化LIMK1的相关性；PAK4－siRNA和LIMK1质粒共转染A549和NCI－H520细胞后观察细胞迁移和侵袭能力变化。结果：沉默PAK4后A549和NCI－H520细胞迁移和侵袭能力明显减弱（P＜0．05）；LIMK1和cofilin蛋白水平无显著变化，而磷酸化LIMK1和磷酸化cofilin水平显著下调；免疫共沉淀结果示PAK4与LIMK1相互绑定；激酶分析实验结果显示，激酶缺陷型PAK4（K350M）使LIMK1磷酸化的作用显著低于野生型PAK4或活化型PAK4（S445N）（P＜0．05）。 Western blot检测结果示非小细胞肺癌组织中PAK4表达上调的程度与磷酸化LIMK1含量呈正相关（P＜0．05）；PAK4－siRNA和LIMK1质粒共转染A549和NCI－H520细胞后，迁移和侵袭细胞数均高于PAK4－siRNA转染组

作者：李冬霞；王永玲；蔡松旺

来源：中国病理生理杂志 2015 年 12期