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目的:研究不同浓度的自噬抑制剂氯喹(CQ)对活化的大鼠肝星状细胞系HSC-T6中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响及可能机制.方法:应用转化生长因子β1(TGF-β1)活化HSC-T6细胞,给予CQ干预24 h.实验分组为:control组、TGF-β1组、TGF-β1+ CQ(15 μmol/L)组、TGF-β1+ CQ(30μmol/L)组和TGF-β1+ CQ(60 μmol/L)组.采用Western blot技术检测微管相关蛋白轻链3(LC3)比值LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、自噬靶蛋白P62、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶13(MMP-13)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)和TIMP-2的表达情况;免疫细胞化学检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;RT-qPCR检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、MMP-13、TIMP-1和TIMP-2mRNA的表达变化.结果:CQ干预后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高且呈剂量依赖性;P62蛋白表达TGF-β1+ CQ组均显著高于TGF-β1组(P<0.01).TGF-β1组的Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量较control组显著增加,TGF-β1+CQ组较TGF-β1组也有明显增加.α.-SMA的表达在TGF-β1组和TGF-β1+ CQ组均显著高于control组(P<0.05),而TGF-β1组和TGF-β1+ CQ各组之间无显著差异.MMP-13表达在TGF-β1+CQ组较TGF-β1组显著下降(P<0.05);TIMP-1和TIMP-2在TGF-β1+ CQ组较TGF-β1组显著升高(P<0.05),且呈剂量依赖性.结论:自噬抑制剂

作者:郭金波;尹凤荣;霍晓霞;罗雨欣;吴梦瑶;张晓岚

来源:中国病理生理杂志 2017 年 33卷 9期

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作者:
郭金波;尹凤荣;霍晓霞;罗雨欣;吴梦瑶;张晓岚
来源:
中国病理生理杂志 2017 年 33卷 9期
标签:
自噬 氯喹 肝星状细胞 Ⅰ型胶原 Ⅲ型胶原 基质金属蛋白酶 金属蛋白酶组织抑制物 Autophagy Chloroquine Hepatic stellate cells Collagen Ⅰ Collagen Ⅲ Matrix metalloproteinases Tissue inhibitor of metalloproteinases
目的:研究不同浓度的自噬抑制剂氯喹(CQ)对活化的大鼠肝星状细胞系HSC-T6中Ⅰ、Ⅲ型胶原表达的影响及可能机制.方法:应用转化生长因子β1(TGF-β1)活化HSC-T6细胞,给予CQ干预24 h.实验分组为:control组、TGF-β1组、TGF-β1+ CQ(15 μmol/L)组、TGF-β1+ CQ(30μmol/L)组和TGF-β1+ CQ(60 μmol/L)组.采用Western blot技术检测微管相关蛋白轻链3(LC3)比值LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ、自噬靶蛋白P62、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、基质金属蛋白酶13(MMP-13)、金属蛋白酶组织抑制物1(TIMP-1)和TIMP-2的表达情况;免疫细胞化学检测Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达;RT-qPCR检测Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、MMP-13、TIMP-1和TIMP-2mRNA的表达变化.结果:CQ干预后LC3-Ⅱ/LC3-Ⅰ比值明显升高且呈剂量依赖性;P62蛋白表达TGF-β1+ CQ组均显著高于TGF-β1组(P<0.01).TGF-β1组的Ⅰ、Ⅲ型胶原表达量较control组显著增加,TGF-β1+CQ组较TGF-β1组也有明显增加.α.-SMA的表达在TGF-β1组和TGF-β1+ CQ组均显著高于control组(P<0.05),而TGF-β1组和TGF-β1+ CQ各组之间无显著差异.MMP-13表达在TGF-β1+CQ组较TGF-β1组显著下降(P<0.05);TIMP-1和TIMP-2在TGF-β1+ CQ组较TGF-β1组显著升高(P<0.05),且呈剂量依赖性.结论:自噬抑制剂