探讨肿瘤坏死因子α对人脐静脉内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂1活性和mRNA表达的影响,以及纤溶酶原激活物抑制剂1基因5'上游序列的调控元件在该基因转录调控中的作用.体外培养人脐静脉内皮细胞,加入不同浓度肿瘤坏死因子α作用不同时间.采用发色底物法测定纤溶酶原激活物抑制剂1活性,Northern印迹分析法测定纤溶酶原激活物抑制剂1 mRNA水平.基因重组技术构建四个含人纤溶酶原激活物抑制剂1基因不同长度5'上游序列的荧光素酶报告基因质粒,瞬时转染进入内皮细胞,并测定荧光素酶的表达情况. 运用聚合酶链反应和序列分析法对构建质粒上的三个AP-1元件分别进行定点突变.结果发现,不同浓度肿瘤坏死因子α作用人脐静脉内皮细胞后,纤溶酶原激活物抑制剂1活性和mRNA表达量均明显增高;当转染质粒含有纤溶酶原激活物抑制剂1基因上游序列-1509/+90和-823/+90时,肿瘤坏死因子α使转染细胞的荧光素酶表达量比对照组明显增高;当转染质粒含有-553/+90和-47/+90时,肿瘤坏死因子α的诱导作用不明显.在纤溶酶原激活物抑制剂1 5'上游序列的三个AP-1元件突变后,肿瘤坏死因子α的诱导作用明显降低.结果提示,肿瘤坏死因子α增强血管内皮细胞纤溶酶原激活物抑制剂1活性与mRNA表达;纤溶酶原激活物抑制剂1活性提高与其mRNA表达增加呈
作者：李晓冬；朱广瑾；王雯；祖淑玉
来源：中国动脉硬化杂志 2003 年 11卷 3期
