目的 构建针对Rno-iR-145的慢病毒表达载体并探讨其在血小板源生长因子(PDGF)诱导的血管平滑肌细胞(VSMC)表型转化中的作用.方法 人工合成驶有酶切位点粘端miR-145 shDNA双链模板序列,克隆于LV3 pGLV/H1/GFP+ Puro-miRNA慢病毒穿梭载体中,转染293T细胞,收获并浓缩慢病毒颗粒,感染大鼠原代VSMC,倒置荧光显微镜下观察VSMC感染后的荧光表达情况,实时荧光定量PCR检测miR-145的表达情况；实验分为空白对照组、PDGF组、PDGF+ miR-145组和细胞转染阴性慢病毒载体组(miR-NC组)；采用实时荧光定量PCR测定miR-145对VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun及分化相关基因SM22α mRNA表达水平的影响.结果 成功构建了microRNA-145慢病毒载体,测定病毒滴度为1×109TU/mL.倒置荧光显微镜下观察大鼠microRNA-145慢病毒表达载体感染成功,MOI值为50,感染72h时感染率最高.实时荧光定量PCR结果显示PDGF可使PCNA、c-Jun表达增加,而使SM22α表达降低；miR-145可使PDGF诱导的去分化型VSMC增殖相关基因PCNA、c-Jun表达降低,分化相关基因SM22α表达增加.结论 miR-145慢病毒载体可高效感染大鼠原代VSMC.感染miR-145慢病毒后可抑制VSMC的表型转化.
作者：王泽慧；边云飞；卫娜；车星星；肖传实
来源：中国动脉硬化杂志 2012 年 20卷 5期
