目的在原核表达载体系统中对HIV-1/2型外壳蛋白多个抗原位点串联基因进行表达、纯化并鉴定其活性.方法人工合成含HIVgp41的2个抗原位点、gp 120的3个群的各3个抗原位点及gp 36的2个抗原位点的串联基因,克隆到原核表达载体pRSETB中,构建重组表达质粒pRSETB-env,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导其在大肠埃希菌BL21(DE 3)中高效表达,利用固化金属离子配体亲和层析技术纯化表达蛋白,利用逐渐降低尿素浓度透析法使目的蛋白复性.用免疫印迹和ELISA法分别对表达产物进行鉴定.结果目的基因在BL 21中有较高表达率,纯化后表达蛋白经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)可见一条约32 KD的蛋白带,与设计分子量相符.免疫印迹、ELISA试验显示该表达蛋白可与HIV患者血清较好结合,而与其它患者血清无交叉反应.结论成功构建了由HIV外膜蛋白多个抗原位点串联基因片段的表达载体pRSETB-env,并在原核细胞中高效表达,表达蛋白经一步纯化后纯度较高,并具有良好特异性和活性.
作者：朱雷；胡燕；侯俊；沈宏辉；杨健洋；貌盼勇
来源：中国公共卫生 2005 年 21卷 2期
