目的 探索小鼠骨髓单核细胞最佳诱导条件,以期提高破骨细胞(OC)的产生数量与纯度.方法 采用梯度离心法分离得到小鼠骨髓单核细胞.分别对首日刺激所用的巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)的2.5ng/ml-160.0ng/ml 7个浓度、16h与24h两个处理时间.以及次日诱导所用的核因子K B受体活化因子配体(RANKL)和M-CSF12.5ng/ml-100.0ng/ml的16个浓度组合进行检测,比较OC产生的情况.以相差显微镜观察细胞形态变化,抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色法进行OC计数.结果 产生的体积大、TRAP染色阳性的多核细胞为OC.首日M-CSF刺激浓度为10ng/ml-20ng/ml组形成的OC数量最多(P<0.05).处理16h组与24h组比较,OC形成率没有统计学差异(30.24±2.84个/孔vs31.22±3.25个/孔,P>0.05).次日诱导采用100ng/mlM-CSF+100ng/ml RANKL组的0C 得率最高;在该条件下,OC数量在第9d达峰值,18d消失.结论 体外OC诱导分化的适宜条件为首先用10ng/ml M-csF将小鼠骨髓单核细胞刺激16-24h,然后用100ng/mlM-CSF+100ng/ml RANKL对非贴壁细胞联合诱导9d.
作者：夏冰；王捷
来源：中国骨肿瘤骨病 2009 年 8卷 2期
