目的:设计构建包含结核分枝杆菌(M.tb)感染多阶段抗原的融合蛋白亚单位疫苗 SHP,在中国 M.tb 感染者和小鼠模型中评价其免疫原性和抗感染保护性。方法选择 M.tb 复制期分泌抗原 Rv0577、休眠期抗原 Rv2623和 PE /PPE 家族抗原 Rv3478,构建并原核表达融合蛋白 SHP;以基于 TB-IGRA 的全血IFN-γ分析试验(WBIA)检测 SHP 及其亚组分蛋白诱导中国 M.tb 感染者和健康对照者外周血淋巴细胞产生的特异性 IFN-γ水平及其差异;以 SHP 联合佐剂 TMD 皮下免疫 C57BL/6小鼠,9周后处死并检测特异性抗体滴度、脾淋巴细胞培养上清中特异性 Th1型细胞因子水平以及肺脏 IFN-γ、TNF-α、IL-10和 iNOS 的表达水平;以 M.tb H37Rv 毒株攻毒4周后评价 SHP/TMD 的抗感染保护性。结果成功构建、表达融合蛋白 SHP,SHP及其亚组分蛋白刺激 M.tb 感染者淋巴细胞产生的 IFN-γ浓度均显著性高于健康对照者[如 SHP 刺激值分别为(1420.0±253.9)pg/mL 和(236.1±95.1)pg/mL,t =2.063,P <0.01]。SHP/TMD 诱导产生显著高水平的特异性 IgG 抗体及其亚类,IgG2a/IgG1趋向 Th1型应答;SHP/TMD 免疫小鼠的脾淋巴细胞诱导显著高水平的特异性 IL-2、IFN-γ和 TNF-α;SHP/TMD 免疫小鼠肺脏组织 IFN-γ、
作者:王晓春;许礼发;韦琴琴;李月亮;王凤龙;张超
来源:中国基层医药 2016 年 23卷 24期