目的 用结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis)特异性抗原Rv3400联合弗氏不完全佐剂(incomplete Freund's adjuvant,IFA)构建结核亚单位疫苗(Rv3400-IFA),在C57BL/6小鼠体内评估其免疫效应.体外用抗原Rv3400感染巨噬细胞RAW264.7并评估其免疫应答.方法 PCR扩增基因Rv3400,构建重组质粒pET28a(+)-Rv3400,转入大肠埃希菌BL21 (DE3) pLysS感受态细胞中,诱导表达并纯化Rv3400蛋白.用抗原Rv3400、阳性对照脂多糖(lipopolysaccharides,LPS),分别刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7,阴性对照为未刺激的巨噬细胞,流式细胞术检测细胞表面分子表达,收集细胞培养上清,ELISA检测细胞因子的分泌.另一方面纯化的Rv3400蛋白与IFA充分乳化构建亚单位疫苗免疫小鼠;C57BL/6小鼠采用数字表法随机分为3组,分别为实验组Rv3400组、阳性对照组Rv3425组、阴性对照组IFA组,每组5只,每2周1次、共免疫3次.分别采用酶联免疫斑点检测技术(enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)和酶联免疫吸附测定(ELISA)技术对免疫小鼠的细胞免疫和体液免疫进行评估.结果 (1)成功克隆表达并纯化结核分枝杆菌特异性抗原Rv3400.(2)体外细胞实验结果显示:Rv3400抗原刺激巨噬细胞,其表面分子CD80、CD86、CD40、MHCⅡ表达量显著提高,阳性细胞比率[分别由未刺

作者：朱琳；徐颖；孔聪；粟海波；黄琪；朱胜玲；王洪海

来源：中国防痨杂志 2016 年 38卷 3期