目的 改进大鼠肝星状细胞(HSC)的分离、纯化方法,为肝相关疾病研究提供稳定细胞来源.方法 采用严格控制灌注液温度、流速及灌注时间的肝逆向两步酶灌注法进行原位组织消化,并使用Pronase E/CollagenaseⅣ联合消化液体外消化肝组织,进而用Percoll密度梯度离心分离HSC细胞;台盼蓝拒染实验检测细胞存活率,CCK-8法测定细胞活力并制作细胞生长曲线;分别采用流式细胞术及免疫荧光细胞化学法对HSC细胞进行鉴定.结果 采用改良方法后,每只大鼠分离收获的HSC细胞稳定在(2.1±0.2)×10 7个,存活率为(96.2±0.8)％,细胞生长状态良好;流式细胞分选测定具有自发荧光特性的HSC细胞所占比例为96.3％,免疫荧光细胞化学法检测分离的HSC细胞表达特征性表面抗原α-SMA和Desmin.结论 采用严格控温、控流、控时的灌注方法及使用Pronase E/CollagenaseⅣ联合消化液有效提高了大鼠HSC细胞的收获数量、细胞活力和纯度,为进一步围绕HSC开展相关研究奠定了细胞基础.
作者：张玉；周曦；易龙；马鑫；张乾勇；糜漫天
来源：局解手术学杂志 2018 年 27卷 1期
