华支睾吸虫mGST新基因的克隆、表达与纯化-临床诊疗知识库

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作者：

伍忠銮；吴德；吴忠道；徐劲；余新炳

来源：

中国寄生虫病防治杂志 2005 年 18卷 5期

标签：

华支睾吸虫谷胱甘肽转移酶克隆基因表达纯化 Clonorchis sinensis glutathione transferase cloning gene expression purification

目的扩增华支睾吸虫一个微粒体谷胱甘肽转移酶(mGST)新基因,明确是否存在内含子,并进行原核表达与纯化. 方法用PCR方法分别从华支睾吸虫成虫cDNA(质粒)文库和基因组DNA中扩增mGST基因并测序,将编码基因定向克隆到原核表达载体pET-30a(+),在大肠埃希菌BL21/DE3中表达,按照Ni-NTA agarose说明书纯化重组蛋白,用SDS-PAGE和TLC分析. 结果 mGST基因全长486 bp,没有内含子,构建的原核表达质粒pET-30a(+)-mGST在大肠埃希菌中得到了有效表达,融合蛋白的分子质量单位约为24 ku.重组蛋白达细菌总蛋白质的11

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