目的：为研究 UQCRB（ubiquinol-cytochrome c reductase binding protein）与中药的作用机制，本实验室进行了 UQCRB 基因的克隆、原核表达和纯化。方法提取人肝癌 SMMC-7721细胞总 RNA，反转录后采用特异引物进行 PCR 扩增获取 UQCRB 基因全长，产物纯化后连入 T 载体测定正确，克隆经 NheI、XhoI 双酶切后连入 PET28a （＋）载体，构建 PET28a（＋）-UQCRB 原核表达质粒。在 BL21（DE3）宿主菌中表达超声处理后，应用 Amicon ? Pro Affinity Concentration Kit-Ni-NTA 纯化，表达及纯化产物用 westernblot 验证。结果构建了 PET28a（＋）-UQCRB表达质粒，经过酶切鉴定和测序鉴定正确。重组 UQCRB 在 BL21（DE3）中的最优表达条件为 IPTG 1mM 诱导5 h。Westernblot 证实了表达和纯化结果。结论重组 UQCRB 的原核表达和纯化成功，为进一步研究 UQCRB 的作用奠定了基础。
作者：孙砚辉；张广献；邝枣园；张晓圆；张韧
来源：中国实验诊断学 2016 年 1期
