目的 免疫筛选卫氏并殖吸虫成虫cDNA表达文库,克隆并表达卫氏并殖吸虫硫氧还蛋白过氧化物酶(TPx),初步评价其免疫诊断价值.方法 用卫氏并殖吸虫病患者的混合血清筛选卫氏并殖吸虫成虫 λZAP cDNA表达文库,取阳性噬菌体进行克隆、测序和序列比对分析.将TPx基因全长片段和前端截短片段分别克隆至原核表达质粒pET28a(+)中,构建rPwTPx(全长型)和rPwTPx_1(截短型)表达载体.构建的重组蛋白经1 mmol/L的异丙基-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达.使用蛋白抽提剂、溶菌酶和核酸酶裂解表达细菌,用组氨酸标签亲和纯化柱(Ni-NTA树脂)纯化rPwTPx和rPwTPx_1,SDS-PAGE检测重组蛋白的表达情况.以rPwTPx、rPwTPx_1和粗抗原作为检测抗原,间接ELISA法检测36份卫氏并殖吸虫病、15份华支睾吸虫病、15份日本血吸虫病、15份片形吸虫病和15份猪囊尾蚴病的患者血清,以及36份健康人血清,评价该重组蛋白的免疫诊断价值.以健康人血清对照组的平均值加上4个标准差作为阳性判断值.所有数据均采用SAS 9.2软件进行统计学分析.结果 克隆的卫氏并殖吸虫TPx基因,经原核表达、纯化,获得其可溶性重组蛋白rPwTPx和rPwTPx_1,相对分子质量(Mr)分别为25 000和22 000.以rPwTPx作为检测抗原的ELISA检测结果显示,卫氏并殖吸虫病患者、健康者、华支睾吸虫病
作者：周岩；陈韶红；李浩；程娜；洪加林；许学年
来源：中国寄生虫学与寄生虫病杂志 2021 年 39卷 1期
