目的:探讨在人肿瘤细胞中稳定表达EGFR-TKD的方法.方法:采用磷酸钙共沉淀基因转染技术,将已构建的pEF-BOS/GST-EGFR-TKD质粒DNA与pBabe-puro质粒DNA共同导入体外培养的人非小细胞肺癌细胞系H1299中.加入嘌呤霉素,对转染的细胞加压筛选,以获得成功转染的细胞.免疫荧光法对重组质粒在H1299中的表达水平及定位进行检测.结果:经嘌呤霉素筛选,8d后对照组细胞全部死亡.转染组部分细胞存活,形成单克隆集落,经多次传代培养后,荧光显微镜下观察见多数集落的细胞胞质内表达GST-EGFR-TKD.结论:通过磷酸钙共沉淀法可成功转染H1299细胞,获得稳定表达EGFR-TKD的人肿瘤细胞.
作者：蔡志宇；曲延征；欧阳奇明；黄晓晶；陈泽辉
来源：中国口腔颌面外科杂志 2006 年 4卷 3期
