目的 建立一种急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)FMS样酪氨酸激酶3(FMS-like tyrosine kinase-3,FLT3)-激酶结构域突变(tyrosine kinase domain,TKD)的高灵敏度检测方法,并将该方法应用于AML微小残留病灶(minimal residual disease,MRD)的监测.方法 构建FLT3野生型质粒和FLT3-D835Y突变型质粒,按一定比例混合后制备FLT3-D835Y突变率为50％、1％、0.1％和0％的质粒标准品,以其为检测对象,联合限制性片段长度多态性(restriction fragment length polymorphism,RFLP)识别法和一代测序法建立新的FLT3-TKD检测方法.用建立的方法检测含不同FLT3-D835Y突变率的质粒DNA标准品和血液样本DNA标准品,以验证方法的灵敏度;用建立的方法检测AML患者治疗前后的基因组DNA样本,以监测MRD.结果 构建的FLT3野生型质粒和FLT3-D835Y突变型质粒经测序证明构建正确.在纯化的质粒DNA和收集的血液样本DNA中,建立的方法通过一代测序结合EcoR V/Xho I双酶切和回收突变片段的步骤,将灵敏度提高至0.1％;用该方法在1名AML患者完全缓解期外周血样本中检测到MRD,而直接一代测序法未检测到MRD.结论 本研究开发了一种高灵敏度检测FLT3-TKD突变的方法,该方法对指导AML治疗以及监测其完全缓解期内MRD具有重要临床意义.

作者：庄晓梅；郭瑶；赵志壮

来源：中国生物制品学杂志 2023 年 36卷 3期