目的：通过昆虫杆状病毒表达系统表达SETD4（SET domain-containing 4）蛋白，并纯化SETD4蛋白，为深入探讨SETD4的功能奠定基础。方法提取小鼠正常肝组织的RNA，通过RT-PCR扩增SETD4基因，并克隆至pFastBac-HTB构建重组载体，再转座获得重组杆粒；通过脂质体介导将重组杆粒转染SF9细胞产生重组病毒，扩增病毒感染细胞并获得重组蛋白；利用Ni2+亲和柱来纯化蛋白，并通过Western Blot及考马斯亮蓝染色鉴定SETD4蛋白。结果经双酶切鉴定及测序证实SETD4基因插入了供体质粒；经PCR鉴定证实SETD4基因插入了穿梭载体；经考马斯亮蓝染色证实纯化得到重组蛋白，用His-Tag抗体和SETD4特异性抗体在50 kD处可检测到目的条带。结论成功利用昆虫杆状病毒表达系统够表达了SETD4，并纯化了SETD4。
作者：雷烨铭；崔航；钟玙沄；王义乾；黄穗；赵舒祺；蔡军伟；姜勇；刘靖华
来源：中国临床解剖学杂志 2015 年 4期
