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目的 研究补阳还五汤抗同型半胱氨酸(Hcy)诱导的脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的作用及机制.方法 以补阳还五汤连续灌胃SD大鼠1周,提取补阳还五汤含药血清.将HUVEC置于5% CO2、37℃细胞恒温培养箱中培养,当细胞汇合度达到80%,选取对数期细胞,开始分组与模型制备.将HUVEC随机分为10组:空白组(10%空白血清)、模型组(10%空白血清+Hcy)、小中大3个百分含量实验组(5%,10%,20%补阳还五汤)、模型组-Ⅰ(10%胎牛血清+Hcy)、抑制剂-Ⅰ组(10 μmol·L-1MAPK抑制剂SB203580+Hcy)、抑制剂-Ⅱ组(10 μmol· L-1ERK抑制剂PD98059+ Hcy)、抑制剂-Ⅲ组(10 μmol·L-1 Rho激酶抑制剂Y27632+ Hcy)、抑制剂-Ⅳ组(10 μmol·L-1MLCK抑制剂ML-7+Hcy),且Hcy造模浓度为3 mmol·L-1.用噻唑蓝(MTT)测定Hcy对HUVEC的毒性作用;用蛋白质印迹法测定丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白的表达量;用Millicell-ERS电阻仪测定各组单层细胞跨膜电阻值(TEER)的变化.结果 与空白组的光密度值(代表细胞增值)为0.95±0.05比较,7个Hcy梯度组的光密度值分别是0.91±0.06,0.88±0.08,0.68±0.06,0.60±0.07,0.58±0.04,0.51 +0.06,0.40 +0.02,差异有统计学意义(P<0.05).P38MAPK蛋白的相对表达量:空白组、模型组、小

作者:刘志勇;游宇;刘玉晖;易文凤;曾兰芳

来源:中国临床药理学杂志 2016 年 32卷 22期

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作者:
刘志勇;游宇;刘玉晖;易文凤;曾兰芳
来源:
中国临床药理学杂志 2016 年 32卷 22期
标签:
补阳还五汤 同型半胱氨酸 丝裂原活化蛋白激酶 细胞通透性 人脐静脉内皮细胞 Buyang Huanwu Tang homocysteine mitogen-activated protein kinase cell permeability human umbilical vein endothelial cell
目的 研究补阳还五汤抗同型半胱氨酸(Hcy)诱导的脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的作用及机制.方法 以补阳还五汤连续灌胃SD大鼠1周,提取补阳还五汤含药血清.将HUVEC置于5% CO2、37℃细胞恒温培养箱中培养,当细胞汇合度达到80%,选取对数期细胞,开始分组与模型制备.将HUVEC随机分为10组:空白组(10%空白血清)、模型组(10%空白血清+Hcy)、小中大3个百分含量实验组(5%,10%,20%补阳还五汤)、模型组-Ⅰ(10%胎牛血清+Hcy)、抑制剂-Ⅰ组(10 μmol·L-1MAPK抑制剂SB203580+Hcy)、抑制剂-Ⅱ组(10 μmol· L-1ERK抑制剂PD98059+ Hcy)、抑制剂-Ⅲ组(10 μmol·L-1 Rho激酶抑制剂Y27632+ Hcy)、抑制剂-Ⅳ组(10 μmol·L-1MLCK抑制剂ML-7+Hcy),且Hcy造模浓度为3 mmol·L-1.用噻唑蓝(MTT)测定Hcy对HUVEC的毒性作用;用蛋白质印迹法测定丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)、细胞外调节蛋白激酶(ERK1/2)蛋白的表达量;用Millicell-ERS电阻仪测定各组单层细胞跨膜电阻值(TEER)的变化.结果 与空白组的光密度值(代表细胞增值)为0.95±0.05比较,7个Hcy梯度组的光密度值分别是0.91±0.06,0.88±0.08,0.68±0.06,0.60±0.07,0.58±0.04,0.51 +0.06,0.40 +0.02,差异有统计学意义(P<0.05).P38MAPK蛋白的相对表达量:空白组、模型组、小