目的 观察脂多糖(LPS)对MC3T3-E1细胞成骨分化的影响及其作用机制.方法 (1)将小鼠MC3T3-E1成骨细胞分为4组:空白组和低、中、高3个剂量实验组.空白组细胞不做任何处理,实验组用低、中、高3个剂量(1,10,100 ng·L-1)LPS处理7 d.以定量PCR检测Toll样受体4(TLR4)的基因表达水平;以免疫印迹法检测TLR4和核转录因子-κB(NF-κB)p65的蛋白表达水平.(2)将成骨细胞分为4组:空白组、LPS组、TLR4 siRNA组和LPS+TLR4 siRNA组.空白组细胞不做任何处理,LPS组加入10 ng·mL-1 LPS,TLR4 siRNA组转染TLR4 siRNA至细胞,LPS+TLR4 siRNA组转染TLR4 siRNA并加入10 ng·mL-1 LPS;处理48 h后收集细胞,以荧光定量仪检测碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)基因表达水平.(3)将成骨细胞分为4组:空白组、LPS组、二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)组和LPS+PDTC组.空白组细胞不做任何处理,LPS组加入10 ng·mL-1 LPS,PDTC组加入50μmol·L-1 PDTC,LPS+PDTC组同时加入10 ng·mL-1 LPS和50μmol·L-1 PDTC;细胞处理48 h后收集细胞,以定量PCR检测ALP和OCN基因表达水平.结果 (1)空白组和低、中、高3个剂量实验组TLR4基因表达水平分别为1.00±0.01,1.07±0.08,2.12±0.23和2.23±0.72;上述这4组的TLR4蛋白的表达量分别为0.35±0.03,0.31±0.02,1.18±0.2

作者：张倩璐；江婷；赵国军

来源：中国临床药理学杂志 2019 年 35卷 21期