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目的 探究肿瘤相关巨噬细胞外泌体中的微小RNA-92b(miR-92b)对三阴性乳腺癌细胞自噬的影响及机制.方法 THP-1被诱导细胞分化为M0、M1、M2型巨噬细胞,提取其所分泌的外泌体以及转染miR-92b mimic、Negative Control的M2型巨噬细胞所分泌的外泌体;将10μg·mL-1的上述外泌体以及等体积的磷酸盐缓冲液与MDA-MB-231共孵育48 h(M0 exo组、M1 exo组、M2 exo组、miR-92b exo组、Negative Control exo组、PBS组),MDA-MB-231细胞转染miR-92b mimic、Negative Control(miR-92b组、Negative Control组),MDA-MB-231细胞与10μg·mL-1 miR-92b exo共孵育的同时转染磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)质粒(miR-92b exo+PTEN组),透射电镜观察上述细胞中的自噬小体,蛋白质印迹法检测上述细胞中自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、p62的表达,双荧光素酶报告基因实验验证miR-92b和PTEN的靶向关系.结果 PBS组、M0 exo组、M1 exo组、M2 exo组、Negative Control组、miR-92b组、miR-92b exo组和miR-92b exo+PTEN组MDA-MB-231细胞自噬小体数分别为(7.00±1.00),(7.33±2.08),(2.00±1.00),(12.67±1.53),(4.00±1.00),(12.67±2.52),(4.00±1.00)和(13.33±1.53)个;这8组MDA-MB-231细胞LC3-Ⅱ相对蛋白表达水平分别为0.94±0.02,

作者:张竞宇;刘晓丹;范莹;温健

来源:中国临床药理学杂志 2023 年 39卷 1期

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作者:
张竞宇;刘晓丹;范莹;温健
来源:
中国临床药理学杂志 2023 年 39卷 1期
标签:
肿瘤相关巨噬细胞 微小RNA-92b 三阴性乳腺癌 自噬
目的 探究肿瘤相关巨噬细胞外泌体中的微小RNA-92b(miR-92b)对三阴性乳腺癌细胞自噬的影响及机制.方法 THP-1被诱导细胞分化为M0、M1、M2型巨噬细胞,提取其所分泌的外泌体以及转染miR-92b mimic、Negative Control的M2型巨噬细胞所分泌的外泌体;将10μg·mL-1的上述外泌体以及等体积的磷酸盐缓冲液与MDA-MB-231共孵育48 h(M0 exo组、M1 exo组、M2 exo组、miR-92b exo组、Negative Control exo组、PBS组),MDA-MB-231细胞转染miR-92b mimic、Negative Control(miR-92b组、Negative Control组),MDA-MB-231细胞与10μg·mL-1 miR-92b exo共孵育的同时转染磷酸酶及张力蛋白同源物(PTEN)质粒(miR-92b exo+PTEN组),透射电镜观察上述细胞中的自噬小体,蛋白质印迹法检测上述细胞中自噬蛋白微管相关蛋白1轻链3-Ⅱ(LC3-Ⅱ)、p62的表达,双荧光素酶报告基因实验验证miR-92b和PTEN的靶向关系.结果 PBS组、M0 exo组、M1 exo组、M2 exo组、Negative Control组、miR-92b组、miR-92b exo组和miR-92b exo+PTEN组MDA-MB-231细胞自噬小体数分别为(7.00±1.00),(7.33±2.08),(2.00±1.00),(12.67±1.53),(4.00±1.00),(12.67±2.52),(4.00±1.00)和(13.33±1.53)个;这8组MDA-MB-231细胞LC3-Ⅱ相对蛋白表达水平分别为0.94±0.02,