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目的 观察糖尿病肾病(DN)小鼠及人肾小管上皮细胞中微小RNA 926(miR-92b)的表达变化,并探讨其对肾纤维化的影响与机制.方法 ①小鼠实验:选取8周龄雄性小鼠12只,随机分为Dia组6只和Con组6只,Dia组腹腔内一次性注射STZ溶液,5个月后即制备成功DN模型;Con组注射等量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液.取两组小鼠肾组织,采用RT-PCR法检测miR-92b表达,Western blotting法检测磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶(PI3K/Akt)相关蛋白Akt、p-Akt和纤维链接蛋白(FN)蛋白表达.②细胞实验:培养人肾小管上皮细胞株HK-2,分为高糖组、低糖组、高渗对照组,分别用25 mmol/L右旋葡萄糖、5 mmol/L右旋葡萄糖、25 mmol/L左旋葡萄糖刺激24 h,采用RT-PCR法检测miR-92b表达,Western blotting法检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白Akt、p-Akt和FN蛋白表达.将HK-2细胞分为DG组、HG组、HG+miR-92b组和HG+Neg组,DG组用25 mmol/L左旋葡萄糖刺激24 h,HG组、HG+miR-92b组和HG+Neg组用25 mmol/L右旋葡萄糖刺激24 h;然后采用细胞瞬时转染技术,将miR-92b转染至HG+miR-92b组细胞中,将miRNEG对照转染至HG+Neg组细胞中,HG组、DG组不转染.转染24 h后收集细胞,采用Western blot-ting法检测Akt、p-Akt和FN蛋白表达.结果 与对照组相比,糖尿病肾病模型组小鼠肾组织和细胞中miR

作者:申永超;蔡胜艳;董天;庞晨;杨伟振

来源:山东医药 2019 年 59卷 11期

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作者:
申永超;蔡胜艳;董天;庞晨;杨伟振
来源:
山东医药 2019 年 59卷 11期
标签:
糖尿病肾病 微小RNA-92b 蛋白激酶B 磷酸化Akt 纤维链接蛋白 肾纤维化
目的 观察糖尿病肾病(DN)小鼠及人肾小管上皮细胞中微小RNA 926(miR-92b)的表达变化,并探讨其对肾纤维化的影响与机制.方法 ①小鼠实验:选取8周龄雄性小鼠12只,随机分为Dia组6只和Con组6只,Dia组腹腔内一次性注射STZ溶液,5个月后即制备成功DN模型;Con组注射等量柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液.取两组小鼠肾组织,采用RT-PCR法检测miR-92b表达,Western blotting法检测磷脂酰肌醇-3激酶-蛋白激酶(PI3K/Akt)相关蛋白Akt、p-Akt和纤维链接蛋白(FN)蛋白表达.②细胞实验:培养人肾小管上皮细胞株HK-2,分为高糖组、低糖组、高渗对照组,分别用25 mmol/L右旋葡萄糖、5 mmol/L右旋葡萄糖、25 mmol/L左旋葡萄糖刺激24 h,采用RT-PCR法检测miR-92b表达,Western blotting法检测PI3K/Akt信号通路相关蛋白Akt、p-Akt和FN蛋白表达.将HK-2细胞分为DG组、HG组、HG+miR-92b组和HG+Neg组,DG组用25 mmol/L左旋葡萄糖刺激24 h,HG组、HG+miR-92b组和HG+Neg组用25 mmol/L右旋葡萄糖刺激24 h;然后采用细胞瞬时转染技术,将miR-92b转染至HG+miR-92b组细胞中,将miRNEG对照转染至HG+Neg组细胞中,HG组、DG组不转染.转染24 h后收集细胞,采用Western blot-ting法检测Akt、p-Akt和FN蛋白表达.结果 与对照组相比,糖尿病肾病模型组小鼠肾组织和细胞中miR