目的:探讨肝内胆管癌相关成纤维细胞(iCAFs)的分离、纯化和鉴定方法,为后续研究奠定基础.方法:在无菌条件下,留取肝内胆管细胞癌(iCCA)组织标本,充分剪碎后置入含Ⅳ型胶原酶和透明质酸酶的消化液中恒温振荡,将所得的单细胞悬液进行免疫磁珠分选纯化,分离出肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)并培养.通过观察细胞形态,并经免疫荧光和流式细胞仪测定,鉴定其是否为iCAFs.结果:iCAFs呈长条形或纺锤形,胞质透明,折光明显,胞核单个、呈圆形或卵圆形,细胞突起相互交错重叠形成网格状排列、密集时呈现“峰-谷”样表现;免疫荧光检测显示,α平滑肌肌动蛋白(+)、波形蛋白(+)、复合型角蛋白抗体(一);流式细胞仪检测示,α平滑肌肌动蛋白(+),同时CD34和CD45均为(一).结论:酶消化法联合免疫磁珠分选可有效分离出高纯度的iCAFs,为进一步研究iCAFs的相关功能研究提供了良好的平台.
作者：杨柳晓；高强
来源：中国临床医学 2016 年 23卷 2期
