目的在毕赤酵母(pichia pastoris)中高效表达人热休克蛋白70(hHSP70),制备具有天然与hHSP70相同结构和活性的重组hHSP70(rhHSP70).方法用PCR法自人DNA文库中克隆hHSP70的DNA,构建真核表达载体pPICZα/hHSP70.经核酸测序确证后,电转化毕赤酵母菌株X-33.用PCR法筛选Zeocin抗性的转染阳性克隆, Western blot法鉴定甲醇诱导的培养上清液中的rhHSP70,筛选高表达工程菌.结果经PCR法克隆的hHSP70 DNA序列与Gene Bank登录的cDNA序列一致.将hHSP70 DNA定向插入pPICZα,构建pPICZα/hHSP70真核表达载体并经电转化获得Zeocin抗性的转染阳性克隆.SDS-PAGE和Western blot分析显示了甲醇诱导的培养基上清中含有rhHSP70,分子量72 kD.氨基酸序列分析证实rhHSP70氨基端15个氨基酸与天然rhHSP70完全一致.rhHSP70表达量高达250mg·L-1.结论获得高效表达rhHSP70的毕赤酵母工程菌.
作者：马杰；焦平；宿晓云；贺巾超；杨莉莉；王建秋；耿学军；范伟全；魏传宇；张英；罗琳；孔宁；颜炜群
来源：中国老年学杂志 2005 年 25卷 5期
