目的:构建尾型同源盒转录因子2 (CDX2) shRNA慢病毒表达载体,并观察下调CDX2基因其对结肠癌细胞生长的影响.方法:根据CDX2mRNA序列设计shRNA,并合成shRNA的互补序列,通过连接酶链接到GV248载体上,用测序方法鉴定阳性克隆后,将构建好的慢病毒表达载体与慢病毒包装载体用Lpofectamine 2000共转染293T细胞,产生慢病毒颗粒并用稀释法进行滴度测定.将CDX2shRNA慢病毒表达载体转染人结肠癌细胞SW480、HT29后,分别用qRT-PCR和Western blot检测CDX2 mRNA及蛋白水平,CCK8实验及克隆形成实验检测细胞增殖能力.结果:DNA测序鉴定证实,CDX2shRNA表达片段正确插入GV248载体中,包装后的病毒滴度为1×109 TU/mL;SW480、HT29细胞转染CDX2-shRNA慢病毒表达载体后,CDX2 mRNA及蛋白表达水平均明显降低(均P＜0.05),但细胞的增殖与克隆形成能力无明显改变(均P＞0.05).结论:成功构建shRNA慢病毒表达载体,其转染结肠癌细胞后能有效地抑制CDX2基因的表达;下调CDX2基因对人结肠癌细胞的增殖无明显影响.
作者：王训凯；郑见宝；孙学军；王孝珑；余钧辉；李孝斌
来源：中国普通外科杂志 2016 年 25卷 4期
